Changes of the Expressions of Orphan and gonADAMTS in Chondrosarcoma Cells

Abstract

Abstract:A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs (ADAMTS) enzimlerinden bazılarının kanserde invazyon ve metastazı kolaylaştıracağı öngörülmektedir. ADAMTS20, gon-ADAMTS olarak ve ADAMTS10 ile -17, orfan ADAMTS olarak adlandırılır. Bunlardan ADAMTS20 hücre dışı matrikste versikan ve agrekanı parçalayan enzim olarak bilinir. Bu çalışmada OUMS-27 hücrelerinde insülinin ADAMTS10, -17 ve -20 üzerine etkilerinin araştırılması amaçlandı. OUMS-27 hücreleri 10 μg/ml insülin içeren Dulbeccos Modified Eagle Medium (DMEM) ortamında kültüre edildiler. Medyum 11. güne kadar iki günde bir değiştirildi. Hücreler 1, 3, 7 ve 11. günlerde toplandı ve her birinde aynı gün RNA izolasyonları gerçekleştirildi. ADAMTS10, -17 ve -20nin RNA ekspresyon düzeyleri uygun primerler kullanılarak qRT-PCR ile hesaplandı. Kontrol grubuyla karşılaştırıldığında, ADAMTS10 mRNA ekspresyonu insülin indüksiyonundan sonra 7 gün içinde gittikçe azalmıştır. Kontrol ile 7. gün grubu arasında (p=0.021) ve 1. gün ve 7. gün grubu (p=0.028) arasında anlamlı farklılıklar vardı. Kontrol grubuyla karşılaştırıldığında ADAMTS17 mRNA ekspresyonu insülin indüksiyonundan hemen sonra 1. günde yükselmiş ve yüksek seviyelerini insülin uygulaması boyunca korumuştur. En belirgin ve istatistiksel olarak anlamlı mRNA konsantrasyon artışı insülin indüksiyonundan 7 gün sonra görülmüştür. Çalışma sonuçlarımız ADAMTS10, -17, ve -20nin kanserin yayılmasında rolü olabileceğini göstermiştir. Her ne kadar ADAMTS10 ve -17nin işlevleri bilinmese de, bunların kondrosarkom hücrelerinde ekspresyon düzeylerinin değiştiği bulunmuştur. ADAMTS proteinleri ile kanser progresyonu arasındaki olası ilişki nedeniyle kondrosarkom hücrelerini tanımlayacak daha fazla çalışmaya ihtiyaç vardır.

Abstract:Some of A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs (ADAMTS) enzymes have been suggested to facilitate invasion and metastasis in cancer. ADAMTS20 is called gon-ADAMTS and ADAMTS10 and -17 are called orphan ADAMTSs. ADAMTS20 degrades versican and aggrecan in extracellular matrix. We aimed to investigate the effects of insulin on ADAMTS10,-17 and -20 in OUMS-27 chondrosarcoma cells. OUMS-27 cells were cultured in Dulbecco s modified Eagle medium (DMEM) containing 10 μg/mL insulin. The medium was changed every other day up to 11th day. Cells were harvested at 1, 3, 7, and 11th days and RNA isolation was performed at appropriate times according to study setup. The levels of RNA expression of ADAMTS10,-17 and -20 were estimated by qRT-PCR using appropriate primers. ADAMTS10 mRNA expression gradually decreased within 7 days after insulin induction compared to control group. There was a significant difference between control and Day 7 groups (p=0.021) as well as Day 1 and Day 7 groups (p=0.028). ADAMTS17 mRNA expression increased right after insulin induction at day 1 compared to control group and protected its high levels throughout insulin application. The most evident and statistically significant increase in mRNA concentration was observed at day 7 after insulin induction (p= 0.014). Our results demonstrated that ADAMTS10,-17 and -20 might have a role in cancer progression. Although functions of ADAMTS10 and -17 are not known, their expression levels have changed in chondrosarcoma cell line. Further studies are needed to characterize chondrosarcoma cells because of the possible association between cancer progression and ADAMTS proteins.