ÖZET Yüksek Lisans Tezi KARBONİK ANHİDRAZ ENZİMİNİN TERE {Lepidium sativum L.) BİTKİSİNDEN SAFLAŞTIRILMASI VE KAREKTERİZAS YONU Sibel ULUATA İnönü Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü Kimya Ânabilim Dalı 45 + vii sayfa 2001 Tez Danışmanı: Yrd. Doç. Dr. A. Alev Karagözler Protein saflaştırılması temel biyokimya çalışmaları içinde önemli bir yere sahiptir. Karbonik anhidraz (CA, karbonat hidrolaz, EC 4.1.1.2.) enzimi hayvan, bitki ve mikroorganizma dünyasında yaygın olarak bulunan bir enzimdir. Bu çalışmada CA enzimi yerel bir besin maddesi olarak kullanılan tere {Lepidium sativum L.) bitkisinden saflaştınlmıştır. Tere yapraklan homojenizatörde parçalandıktan sonra (NFL^SC^ saturasyonu ile proteinler çöktürüldü. Çökelti tamponda çözülerek (NFL^SCm diyaliz ile uzaklaştırıldı. Protein çözeltisi DEAE-selüloz kolonundan geçirilerek iyon değişim kromotgrafisine tabi tutuldu ve enzim aktivitesi gösteren fraksiyonlar birleştirildi. Saflaştınlan enzimin substratına karşı kinetiği incelendi. Optimum pH ve optimum sıcaklık sırasıyla 8.5 ve 70°C olarak tespit edildi. Molekül ağırlığı ve subünite sayısı tayini için jel permeasyon kromatografisi ve poliakrilamid jel elektroforez teknikleri uygulandı Ayrıca bazı genel inhibitörlerin enzim aktivitesine etkileri incelendi. ANAHTAR KELİMELER: Bitki karbonik anhidrazı, saflaştırma, tere. V,
ABSTRACT Master Thesis CHARACTERIZATION AND PURIFICATION OF CARBONIC ANHYDRASE ENZYME FROM GARDEN CRESS {Lepidium sativum L.) Sibel ULUATA İnönü Universty Graduate School of Natural Applied Sciences Departmant of Chemistry 45 + vii pages 2001 Supervisor: Assis. Prof. Dr. A. Alev KARAGÖZLER Purification of proteins has an important place in biochemical studies. Carbonic anhydrase (CA, carbonate hydrolase, EC 4.1.1.2.) is widely distributed in animal, plant and microorganism world. In this study, CA purification from locally produced garden cress {Lepidium sativum L.) is conducted. Garden cress leaves were homogenized and proteins were precipitated using (NH4)2S04 saturation. Precipitate was dissolved in buffer and (NH4)2S04 was removed by dialysis. DEAE-Cellulose ion exchange chromatography was applied to the protein solution and fractions demonstrating catalytic activity were pooled. Kinetics of the enzyme towards its natural substrate was investigated. Optimum pH and optimum temperature were measured to be 8.5 and 70°C, respectively. In order to determine the molecular weight and subunit number of the enzyme gel chromatography and polyacrylamide gel electrophoresis were applied. Inhibition effect of some common inhibitors was also investigated. KEY WORDS: Plant carbonic anhydrase, purification, garden cress. /l f /%**>' \ SSAaSS