Tekrarlı kesikli işlemle lakkaz üretimi

Abstract

Lakkaz enzimi geniş substrat özgüllüğünden dolayı kağıt, tekstil, petrokimya gıda, ilaç ve kozmetik endüstrisi gibi pek çok endüstriyel alanda kullanılabilir. Beyaz çürükçül funguslar en iyi lakkaz üreticisi organizmalar olmalarına rağmen üretilen enzim miktarı endüstriyel alanlarda kullanım için yeterli değildir. Bu nedenle lakkaz üretim koşullarının optimize edilmesi gerekir. Bu çalışmada iyi lakkaz üreticileri olan Funalia trogii ve Trametes versicolor kullanılmış ve çeşitli koşullar optimize edilmiştir. Optimizasyon çalışmaları kesikli yönteme göre daha avantajlı olarak saptanan tekrarlı kesikli işlemle gerçekleştirilmiştir. Çalışmaların çoğu STO (Stok Temel Ortam) ve STO+0.5 mM Cu ortamlarında gerçekleştirilmiştir. Çalkalama, başlangıç pH' sı, inkübasyon sıcaklığı, pelet miktarı, zaman aralığı ve bakır konsantrasyonunun lakkaz üretimine etkisi araştırılmış ve her iki fungus için de optimum lakkaz üretim koşulları saptanmıştır. Daha sonra, bu fungusların lakkaz üretim yeteneğine en uygun koşullarda ABTS [2,2'-Azino-bis(3-etilbenztiazolin-6-sülfonik asit)], şiringaldazin, guaiakol ve 2,5-ksilidin gibi indükleyicilerin etkisi test edilmiş ve her iki fungus için en etkili indükleyici maddeler ve konsantrasyonları saptanmıştır. Çalışmanın son aşamasında F. trogii ve T. versicolor tarafından sentezlenen lakkaz enziminin moleküler ağırlıkları SDS PAGE ile saptanmıştır. Bu çalışmanın sonuçları, uygun funguslar, yöntemler ve indükleyiciler kullanılarak optimum koşullar altında yüksek miktarlarda lakkaz elde edilebileceğini göstermektedir.

Because of its broad substrate specifity, the laccase enzyme can be used in many industrial fields. Although the white rot fungi are the best laccase producer organisms, the amount they produce is not sufficient for industrial use. Hence, it is necessary to optimize the conditions in order to increase laccase enzyme production to be used in different fields. Funalia trogii and Trametes versicolor which are good laccase producers were used in this study and various culture conditions were optimized. The optimization works were conducted in ?repeated batch process?, which proved more advantegous to ?batch process?. Most of the the studies were performed in SBM (Stock Basal Medium) and SBM+0.5 mM Cu media. The effect of agitation, initial pH, incubation temperature, amount of pellet, time interval and copper concentration on laccase production was investigated and optimum laccase production conditions were determined for both fungi. After that, the effect of some inducers such as ABTS [2,2'-Azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid)], syringaldazine, guaiacol and 2,5-xylidine on laccase production ability of these fungi was tested under optimal conditions and the most effective inducers and their concentrations were determinated for both fungi. In the last stage of the study the molecular weights of the laccases, which were synthesized by F. trogii and T. versicolor, were determinated by SDS PAGE. The results of this study show that it is possible to obtain high amounts of laccase by using the suitable fungi, processes and inducers under optimal conditions.