ÖZET Yüksek Lisans Tezi SPİNAL KORD İSKEMİ OLUŞTURULAN SIÇANLARDA KASPAZ-3 AKTİVİTESİ VE MELATONİNİN KORUYUCU ETKİSİNİN ARAŞTIRILMASI Demet DOĞAN İnönü Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü Biyoloji Anabilim Dalı 63+ vii sayfa 2008 Danışman: Yrd. Doç. Dr. Songül AYDEMİR Kaspazlar, hücre ölümü yani apoptozisde anahtar rol oynarlar. Deneysel iskemi ve travmatik beyin yaralanması sonucunda oluşan nöronal hücre ölümü, kaspaz-3`ün aktive olmasıyla gerçekleşmektedir. Bu çalışmada spinal kord iskemisi yapılarak, iskemide kaspaz-3 aktivitesi ve güçlü bir antioksidan hormon olarak bilinen melatoninin, yeterince bilinmeyen anti-apoptotik özelliğinin araştırılması amaçlanmıştır. Sinir sisteminde iskemi, nörodejenerasyon, inflamatuar hastalıklar ve travmatik yaralanmalarda nöronal hücre ölümünün bir şekli olan apoptoz gözlenir. Kaspazlar apoptozun ortaya çıkışında önemli hücre içi proteazlardır. Kaspazlar hücrede inaktif olarak bulunurlar ve proteolitik olarak birbirlerini aktifleştirirler. Kaspaz-3`ün nöronal gelişim ve yaralanmada oldukça önemli olduğu gösterilmiştir. Bu proteazın bozulması nörolojik defektlere yol açar. Çalışmamızda 30 adet yetişkin erkek Wistar tipi albino sıçanlardan 4 grup oluşturuldu: 1.grup (Kontrol), 2.grup (Deneysel spinal kord iskemi oluşturulan grup), 3.grup (Melatonin uygulanan grup), 4.grup (Melatonin+İskemi oluşturulan grup). Hayvanlara anestezi yapıldıktan sonra spinal kord iskemi modeli uygulandı. Bütün denekler 48 saat yaşatıldıktan sonra spinal kord örnekleri alındı. Bu dokularda kaspaz-3 aktivitesinin gözlenmesi için Western-Blot tekniği uygulandı. Kontrol grubuna göre spinal iskemi grubundaki kaspaz-3 bandı belirgin bir şekilde görülürken, melatonin uygulamasiyla melatonin + iskemi grubunda bu bandın görünürlüğü ortadan kaybolmuştur. Bu sonuçlar iskemi uygulamasına bağlı kaspaz-3 aktivitesinin dolayısı ile apoptozisin arttığını, melatoninin ise kaspaz-3 aktivitesini inhibe ederek spinal kord iskemi hasarını önleyebileceğini ortaya koymuştur. Anahtar Kelimeler: Spinal kord iskemi, Kaspaz-3, Melatonin
ABSTRACT Master Thesis DETERMINATION OF CASPASE-3 ACTIVITY AND PROTECTIVE EFFECT OF MELATONIN AFTER SPINAL CORD ISCHEMIA IN RATS Inonu University Graduate School of Natural and Applıed Sciences Department of Biology 63+ vii pages 2008 Supervisor: Assist. Prof. Songül AYDEMİR (PhD) Caspases, play a major role in apoptosis which is known cell death. Neuronal cell death that takes place at result of experimental ischemia and traumatically brain injury occurs with activation of caspase-3. In this study, we aimed to investigate the activity of caspase-3 in ischemia and strong antioxidant hormone melatonin?s anti-apoptotic property which is not entirely known, using spinal cord ischemia. In the nervous system, apoptosis, a type neuronal cell death, is observed at ischemia, neurodegeneration, inflammatory diseases, and traumatically injury. Caspases are the important intracellular proteases in the development of apoptosis. Caspases are inactive in cell and proteolytically activated each other. It is showed that caspase-3 is fairly important for neuronal development and injury. Breaking of these proteases causes neurological defects. In our study, thirty adult Wistar Albino rats were divided into 4 groups: Group 1: control, group 2: experimental spinal cord ischemia, group 3: melatonin (50mg\kg) treated group, and group 4: melatonin (50mg\kg) followed ischemia. After animals were anesthetized, spinal cord ischemia model was used. All animals were kept alive for 48 hours and then spinal cord samples were removed. In these tissues, caspase-3 activities were analyzed using Western blot technique. While, caspase-3 band has been obviously visible in the spinal cord ischemia group compared with control, this band disappeared with melatonin treatment in the melatonin plus ischemia group. These results indicated that caspase-3 activity increased in the ischemia, consequently increased apoptosis, and that melatonin can be prevented to spinal cord ischemia injury inhibiting caspase-3 activity. Key Words: Spinal cord ischemia, Caspase-3, Melatonin
